Cannabis Grow Forum

Erstellt am 09.11.2009 - 03:31

Anleitung für
Pilzreinkulturen

Diese Kulturen wurden von unseren Mycologen aus Sporen kultiviert und durch natürliche Selektion veredelt. Wir weisen Ausdrücklich darauf hin, dass diese Kulturen nur zum Beimpfen von Substraten verwendet werden dürfen. Kopieren und Weiterverkaufen ist ausdrücklich untersagt!

Die Reinkultur besteht im Wesentlichen aus veredeltem Pilzmycel auf speziellem Agar – Nährboden. Für den Versand verwenden wir spezielle Zellkulturflaschen. Darin wird die Kultur vor Kontaminationen geschützt, der Pilz bekommt durch einen eingebauten Filter genug Sauerstoff zum atmen. Im folgenden wird in einfachen Schritten beschrieben, wie man aus der Kultur Grain (mit Pilzmycel durchwachsenes Getreide) zum Beimpfen von Fruchtungssubstraten herstellen kann.

Wichtig: Die Kultur bitte nur in einem sterilen Raum öffnen! (Glove Bag oder HEPA-Filter).


Empfohlenes Zubehör:

Haarnetz und Gesichtsmaske
Latex Handschuhe
Spiritus Brenner
Skalpell „Nr. 7’“ mit sterilen Klingen
Arbeitsflächen Desinfektion
Handdesinfektion
Petrischalen mit Agar-Nährboden
Parafilm zum versiegeln der Petris
Glove Bag (steriler Arbeitsraum)


Allgemeine Vorgehensweise:

Wie bei jedem Arbeitsschritt ist auch hier absolut steriles, sauberes und schnelles Arbeiten eine Voraussetzung für den Erfolg! Vor Arbeitsbeginn die Hände gründlich waschen und desinfiziern. Wir empfehlen das Tragen von Handschuhen, Mundschutz und Haarnetz und das Arbeiten in einer Impfbox/Glovebox oder vor einem HEPA-Filter.

Um das Skalpell ganz sauber zu bekommen, empfehlen wir den Skalpellhalter kurz über einem Spiritusbrenner zu halten (möglichst bis die Spitze glüht). Bevor das Skalpell mit dem Pilz in Berührung kommt, bitte auf Zimmertemperatur abkühlen lassen, erst jetzt die Klinge raufgeben.

VORSICHT: LATEX HANDSCHUHE UND DESINFEKTIONSMITTEL SIND LEICHT ENTFLAMMBAR. VERBRENNUNGSGEFAHR!!!!!







Um durch den engen Hals der Gewebekulturflasche zu gelangen, ist es notwendig hier einen dünnen, langen Skalpellgriff zu verwenden (Nr. 7). Für jede Petrischale, auf welche man die Kultur übertragen will, reicht ein ca 3 x 5 mm großes Stück mit Mycel bewachsener Agar. Mit Hilfe des Skalpells wird erst die Kultur zerteilt und dann die Stücke vorsichtig einzeln auf die Petrischale übertragen. Wir empfehlen das Mycelstück so auf den Agar in der Petrischale zu legen, dass die mit Mycel bewachsene Seite nach unten zeigt. Die fertig inokulierten Petris bitte sofort mit Parafilm versiegeln.






Auch unter besten Bedingungen kann es hierbei zu Ausfällen kommen, deshalb empfehlen wir mit jeder Kultur mehrere (rund 5 Stück) Petrischalen zu beimpfen. Üblicherweise werden die Petris mit Datum, Gattung und evtl. einer fortlaufenden Nummer beschriftet. (Lackstifte, "Edding-Stifte" oder CD-Marker halten gut auf der Petrischale.)Zum Durchwachsen werden die Petrischalen dunkel bei der für die jeweilige Sorte geeigneten Spawn-Run Temperatur gelagert.

Sobald die Petrischale vollständig mit Mycel bewachsen ist, kann damit Grain beimpft werden.

[Dieser Beitrag wurde am 10.11.2009 - 01:57 von sly aktualisiert]

Erstellt am 12.11.2009 - 20:37

Anleitung für die
Herstellung von Sporen Spritzen



Vor allem für Hobby-Mykologen hat sich das Arbeiten mit Sporenspritzen bewährt. Kleine Substratmengen oder Grain (Korn - meist Roggen - das vom Pilz duchwachsen wird und später zum Beimpfen des Fruchtungssubstrates verwendet wird) können so auch wenn man nicht unter perfekt sterilen Bedinungen arbeitet ohne größere Kontaminations-Ausfälle hergestellt werden.


Empfohlenes Zubehör:
Sporenabdruck
Sturzglas (Sterilisierbar!!!)
Skalpell mit sterilen Klingen
Leere Spritzen und Kanülen
Latex Handschuhe
Gesichtsmaske und Haarnetz
Filter Scheibe
Arbeitsflächen Desinfektion - Bazillol
Handdesinfektion
Wasser
Glove Bag (steriler Arbeitsraum)

Allgemeine Vorgehensweise:

Wir empfehlen pro Glas ca. 100 ml Wasser und einen Sporenabdruck zu verwenden. Die Gläser werde mit Wasser gefüllt und der Deckel nochmals mit Alufolie umwickelt und für 30 Minuten bei 121 °C / 250 °F / 15 psi / 1,05 bar sterilisiert - die Zeit wir gemessen, ab dem Zeitpunkt an dem das gewünschte Druckniveau erreicht ist. Um einen Druckausgleich zu ermöglichen, ist es wichtig dass die Deckel der Gläser mit einem Loch (ca 1 cm Durchmesser) versehen werden. Um das Eindringen einer Kontamination in die Gläser zu verhindern, empfehlen wir das Arbeiten vor einem Luftfilter oder einer Impfbox. Eine weiter Methode um Kontaminationen zu vermeiden, ist es auf die Gläser (unter den Deckel) Filter zu legen.






Um das Kontaminationsrisiko gering zu halten, ist möglichst steriles arbeiten wichtig! Bitte für jeden Sporenabdruck eine frische, sterile Skalpellklinge verwenden.


So bald die Gläser auf Raumtemperatur (unter 30 °C) abgekühlt sind, können diese weiterverarbeitet werden. Mit einem Skalpell werden nun die Sporen von den Abdrücken in das Wasser gekratzt. Wichtig ist dass man hierbei schnell und sauber arbeitet. Das Berühren der Sporen sollte vermieden werden. Bitte die Hände sauber waschen und desinfiziern. Das Tagen von Handschuhen, Mundschutz und Haarnetz wird sehr empfohlen.





Die Sporen werden vom Abdruck in das Wasser gekratzt.


Nachdem die Sporen in das Glas gekratzt wurden, das Glas mit einem Deckel OHNE LOCH verschließen und gut schütteln, um die Sporen gleichmäßig im Wasser zu verteilen. Zum Aufziehen der Spritzen wieder den Deckel mit Loch aufsetzen. Wir empfehlen pro Spritze rund 10 ml Sporenlösung abzufüllen. Hierbei ist es sehr wichtig, dass die Nadel nicht berührt wird. Sollt die Nadel kontaminiert werden, bitte über einem Spiritusbrenner erhitzen bis sie glüht, kurz abkühlen lassen und sofort wieder verschließen.









Wir empfehlen die Sporenspritzen Luftdicht (Zipp-Lock-Bag) zu verpacken. Kühl (max. 20 °C) und dunkel gelagert sind sie mindestens 1 Jahr keimfähig.

Um die Keimfähigkeit zu testen, können einige Mililiter (1 bis 2 Tropfen) auf eine Petrischale gegeben werden. Je nach Pilzgattung sollte innerhalb weniger Tage bis 1 Woche das Mycelwachstum einsetzen.

Erstellt am 12.11.2009 - 20:38

In Bearbeitung